使用ELISA试剂盒时必定要注意相关的事项

　　说明：ELISA操作严格要求定当做出好实验。

　　按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。ELISA试剂盒自配的缓冲液使用pH计测量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

　　为确保试验的成功，使用ELISA试剂盒时必定要注意相关的事项。

　　1， 确认本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

　　2， 将倍比稀释的规范品各0.1ml顺次参加一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔参加。

　　3， 酶标板加上盖，37℃反响90分钟。

　　4， 反响后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗刷2次。

　　5，将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响60分钟。

　　6， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分钟左右。

　　7，将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响30分钟。

　　8， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，ELISA试剂盒每次浸泡1-2分钟左右。

　　9， 按每孔0.1ml顺次参加TMB显色工作液，37℃避光反响，反响过程中，要常常的调查，当肉眼可见规范品的前3-4孔有显着的梯度蓝色，后3-4孔不同不显着时，即可参加TMB停止液0.1ml/孔。（显色反响长不要超越30分钟）。

　　10，用酶标仪在450nm测定O.D.值。

　　11，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也能够使用各种应用软件来核算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。