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大鼠ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

 发布时间:2019-12-19 点击量:961
  大鼠ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
  1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
  3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  试剂的准备
  标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
  2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
  操作步骤
  1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。大鼠ELISA试剂盒每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
  8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
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