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你未必知道的ELISA实验秘诀

 更新时间:2023-06-24 点击量:219
  你未必知道的ELISA实验秘诀 
  只有不断学习与实验才能逐渐积累经验,做出更好的实验效果。在前面的资讯内容及技术文章中,为大家分享许多ELISA试剂盒的操作技巧、要求、方法等相关技术,我公司技术员根据自身多年【ELISA试剂盒实验】经验,整理出新的ELISA操作技巧。下面我们一起来看下具体内容,你未必知道的ELISA实验秘诀:
  1.加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
  2.显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
  3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
  4.合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
  5.液体全部加入酶标孔后,zui好将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
  6.洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
  7.吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
  8.要尽量做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
  9.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
  10.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。
  11.作时必须戴手套,穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度。
  12.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
  13.样品稀释液应用加液器加注,并经常校对其准确性。
  14.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟,或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
  15.不同批号试剂组分不得混用。
  16.ELISA试剂盒实验洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
  17.用于检测的样品应保持新鲜。
  18.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
  19.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
  20.要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定。
  21.在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
  22.吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
  23.将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孑L壁接触,液滴会自然流下去。吸入液体时的zui好的方法是吸两档打一档,防止由于枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差。
  24.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
  25.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只要取出所需量。
  26.由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
  27.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
  28.检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
  29.底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
  30.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
  31.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
  32.没有去离子水或双蒸水时,可以使用纯净水配制溶液,切勿使用自来水。