欢迎进入上海瑞番生物科技有限公司!
技术文章
首页 > 技术文章 > ELISA试剂盒洗涤的正确方法

ELISA试剂盒洗涤的正确方法

 发布时间:2022-11-27 点击量:239
  ELISA试剂盒洗涤的正确方法
  ELISA靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。今天小编为大家总结ELISA试剂盒洗涤的两大方法。
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔内反应液;
  2.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
  4.吸干孔内液体。吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;
  5.重复操作c和d,洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
  二、流水冲洗式
  初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗 2分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。
  除了洗涤方式,还有主洗涤参数、洗涤次数等在实验中也是至关重要的,关于洗涤实验的优化方面,我司技术也给大家分析分析:
  ELISA试剂盒洗涤参数:
  第一、洗涤量
  自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景,那么不要犹豫,将洗涤量调为高,最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到,从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200μl。如果你的试剂盒也是这样,那么制造商可能会建议使用300μl洗涤液进行洗涤,以便清洁整个反应孔的壁。一般来说,洗涤量越高,则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
  第二、洗涤循环的量
  【ELISA试剂盒洗涤】次数越多,背景越低。然而,太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,ELISA板的制造商会对洗涤次数提出建议。一般而言,制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板,必须优化洗涤次数。
  控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说,96孔板的每个孔能容纳330至460ul。不过,有些自动化洗板机可设置程序,分配远远超出这个量的洗涤液,比如1ml。它是如何做到的呢?其实很简单,就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说,随着分液器分配更多的液体,抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量,但不会溢出到其他孔中。